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細胞凋亡

細胞凋亡是維持機體內環境穩定,清除衰老和無能細胞的重要機制。細胞凋亡與胚胎發育、自身免疫耐受、腫瘤發生、病毒感染等生理、病理過程密切相關,近年來一直是生物醫學領域各專業的研究熱點。

1.Annexin V/PI

Annexin V是一種磷脂結合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但凋亡中晚期的細胞和死細胞由于細胞膜通透性的增加,PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用,就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。

2.TUNEL

基因組DNA斷裂時,暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上熒光素(FITC)標記的dUTP (fluorescein-dUTP),從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測,達到檢測細胞凋亡的目的。

3.JC-1

JC-1是一種陽離子脂質熒光染料,可作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-1有單體和多聚體兩種存在狀態,在低濃度時以單體的形式存在,高濃度時以多聚體形式存在,兩者的發射光譜不同,但均可在流式細胞儀綠色(FL-1)通道檢測出綠色熒光,JC-1可透過正常細胞膜以單體狀態聚集胞內,正常健康線粒體的膜電位具有極性,JC-1依賴于跨膜電位的極性被迅速攝入線粒體內,并因濃度增高而在線粒體內形成多聚體,多聚體發射光為紅色熒光;可被流式細胞儀的紅色(FL-2)通道檢測到,而細胞發生凋亡時,線粒體跨膜電位被去極化,JC-1從線粒體內釋放,紅光強度減弱,以單體的形式存在于胞質內發綠色熒光。根椐這一特征檢測線粒體膜電位的變化。

結果實例



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